霉菌是一類絲狀真菌，廣泛存在于潮濕、溫暖環(huán)境，通過菌絲體形成絨毛狀或絮狀菌落，依靠孢子繁殖傳播。它既能分解有機(jī)物維持生態(tài)平衡，也可能引發(fā)霉變、腐敗甚至人體感染。

一、樣本采集與處理問題

1.采樣代表性不足

固態(tài)樣品（如谷物、堅(jiān)果）因霉菌分布不均易漏檢，需采用五點(diǎn)采樣法并研磨至粒徑＜2mm以提高均質(zhì)性。

關(guān)鍵措施：干燥樣品優(yōu)先選用耐高滲培養(yǎng)基（如DG18）同步培養(yǎng)。

2.假陰性風(fēng)險(xiǎn)

樣本放置＞4小時(shí)可致孢子活性顯著下降；臨床樣本中雖有癥狀但檢出陰性，可能因早期感染菌量不足、采樣不當(dāng)或檢測(cè)誤差。

改進(jìn)方案：

建立"采樣-處理"時(shí)間軸（建議≤2小時(shí)）

無菌部位標(biāo)本需結(jié)合組織病理學(xué)與培養(yǎng)結(jié)果綜合判斷

二、培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件缺陷

培養(yǎng)基選擇誤區(qū)

特別建議：高滲食品（蜜餞、腌制品）需同步使用PDA+DG18雙培養(yǎng)基。

培養(yǎng)環(huán)境失控

溫濕度偏差：28±1℃/RH 65-80%為最佳條件，濕度波動(dòng)可致檢出率偏差達(dá)42%

交叉污染：

培養(yǎng)箱內(nèi)霉菌孢子通過平皿縫隙污染（玻璃平皿風(fēng)險(xiǎn)＞塑料平皿）

冷凝水滴落導(dǎo)致菌落蔓延

解決策略：

每周2次紫外線+消毒劑（75%酒精）擦拭培養(yǎng)箱

培養(yǎng)前37℃烘干平皿消除冷凝水

三、鑒定與結(jié)果判讀難點(diǎn)

1.污染菌誤判

血培養(yǎng)檢出曲霉菌屬多屬污染，而鐮刀菌屬可能為致病菌

判定標(biāo)準(zhǔn)：

非無菌標(biāo)本需鏡檢與培養(yǎng)一致+連續(xù)陽性+37℃生長(zhǎng)能力

陰道分泌物需區(qū)分酵母菌與霉菌，勿籠統(tǒng)報(bào)告"霉菌"

2.技術(shù)局限性

形態(tài)學(xué)鑒定需配合乳酸酚棉藍(lán)染色及ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株比對(duì)

PCR檢測(cè)中引物設(shè)計(jì)不當(dāng)或交叉污染可致假陽性（推薦UV滅菌工作臺(tái)）

四、實(shí)驗(yàn)室污染防控

1.培養(yǎng)箱污染驗(yàn)證

空白平板置培養(yǎng)箱48h，出現(xiàn)菌落即確認(rèn)污染

2.環(huán)境監(jiān)控

沉降菌檢測(cè)每周3次，潔凈區(qū)需符合單方向工作流要求

3.操作規(guī)范

病原菌檢測(cè)需在二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行